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紫外分光光度計法在測定
更新時間:2018-09-25 點擊次數:2812

目的:  建立石淋通分散片中蘆丁的含量測定方法。方法:  采用紫外分光光度計法,以蘆丁為對照,檢測波長為 273nm。結36. 48μg /ml 范圍內,吸光度與其濃度呈良好線性關系 ( r = 0.論:  該方法簡便、準確、重復性好,可作為控制本品質量標準的指標。

1儀器與試藥

島津 UV - 2550 紫外分光光度計; HH - s 恒溫數顯水浴鍋 ( 江蘇金壇儀器廠) ; 水為超純水; 其余所用試劑均為分析純。蘆丁對照品 ( 中國藥品生物制品檢定所提供,供 UV 含量測定用,批號為 110753 - 200413) ; 石淋通分散片

3 批,批號為: 110905、110906、110907,由貴港市冠峰制藥有限公司提供。

2方法與結果

2. 1 對照品溶液的制備 精密稱定在 120  干燥至恒重的蘆丁對照品 15. 2mg,置 10ml 量瓶中,加 65% 乙醇 5ml,微熱使溶解,放冷,加 65% 乙醇稀釋至刻度,搖勻,精密量取 2ml,置 50ml 量瓶中,加 30% 乙醇稀釋至刻度,搖勻,即得每 1ml 含蘆丁 60. 8μg。
2. 2紫外大吸收波長及線性范圍考察    精密量取對照品

溶液 1. 0ml、2. 0ml、3. 0ml、4. 0ml、5. 0ml、6. 0 ml 分別置

10ml 容量瓶中,各加醋酸 - 醋酸鈉緩沖液 ( 取 0. 2mol /L 醋酸鈉溶液 45. 2ml,緩緩攪拌加入 0. 2mol /L 冰醋酸溶液至 pH5. 5,即得) 1ml、0. 1mol /L 三氯化鋁溶液 1ml,搖勻,加 30% 乙醇稀釋至刻度,搖勻,在 200 ~ 400nm 范圍內掃描其紫外大吸收波長,確定為 273nm; 照分光光度法 ( 中國藥典 2010 年版一部附錄Ⅴ) ,以相應的試劑為空白,在 273nm 波長處測定吸收度,以吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線,得回歸方程 Y = 0. 035X - 0. 0067,相關系數 r = 0. 9997。結果表明: 蘆丁濃度在 6. 08 ~ 36. 48μg /ml 范圍內,與吸光度呈良好線性關系。

2. 3 供試品溶液的制備 取本品 20 片,研細,混勻,取 0. 2g,精密稱定,置索氏提取器中,加 65% 乙醇加熱回流 4 小時,提取液濃縮至小體積,轉移至 100ml 量瓶中,放冷,加 65% 乙醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,備用。精密量取續濾液 0. 8ml,置 10ml 量瓶中,照測定法項下的方法,自 “加醋酸 - 醋酸鈉緩沖液 ( pH5. 5) 1ml 起,依法測定吸收度。從標準曲線上計算出供試品中于蘆丁的含量,即得。 2. 5 精密度試驗 分別吸取同一供試品溶液 ( 110905) ,連續測定 6 次即得。測得供試品 RSD 為 0. 61% 。

2. 6 重復性試驗 取同一批號 ( 110905) 樣品,按供試品溶液制備方法制備 6 份,分別進樣,測定,即得。結果測得蘆丁為 24. 8mg / 片,RSD = 1. 88% ( n = 6) 。表明該方法重復性良好。

2. 7 穩定性試驗 取同一供試品溶液分別于 0、15、30、60、90、120min 進行測定,即得。結果供試品中蘆丁含量RSD 為 0. 62% ,表明供試品溶液在 2h 內保持穩定。

2.8  加樣回收試驗   取已測知含量 ( 24. 8mg / 片,批號110905)  的供試品 0. 1g,精密稱定,精密加入 13. 24mg /ml蘆丁對照品溶液 0. 9ml,按供試液制備項下的方法制備。結果蘆丁平均回收率為 97. 9% ,RSD 為 1. 10% ( n = 6) ,結果見表 1。

表1  加樣回收試驗測量結果 ( n = 6)

樣品中含對照品加測得回收平均回收RSD量 ( mg)入量 ( mg)量 ( mg)率 ( % )率 ( % )( % )
                    
11. 631    11. 916    23. 244    97. 4        
11. 494    11. 916    23. 012    96. 5        
11. 838    11. 916    23. 545    98. 2        
11. 712    11. 916    23. 468    98. 7    
11. 563    11. 916    23. 141    97. 1        
11. 666    11. 916    23. 512    99. 4                        

2. 9 樣品測定 按供試液的制備及檢測方法,測定 3 批石淋 通 分 散 片 中 蘆 丁 含 量 ( mg / 片 ) 分 別 為 25. 1、

3討論

采用超聲處理 30min、加熱回流 1h、索氏提取 4h 進行提取方法考察,結果采用索氏提取測得含量結果高,故采用索氏提取為提取方法。采用水、65% 乙醇、無水乙醇作提取溶劑進行考察,用 65% 乙醇提取所得含量比高,且雜質較少,故采用 65% 乙醇作為提取溶劑。以索氏提取2h、4h、6h,進行提取時間考察,索氏提取 4h,測得含量結果高,故索氏提取以 4h 為好。本實驗設計含量測定方法合理可行,達到預期目的。

 

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